En estos días todos hemos escuchado hablar de los test de detección del coronavirus y la famosa PCR. ¿Pero que es esto de la PCR? ¿por qué tarda tanto es dar el resultado?.
Para responder a estas preguntas primero os tengo que dar un poco la chapa con un poco de teoría (con en tiempos del colegio jaja) pero prometo hacerlo de manera amena, corta y facil de entender para todos.
Para empezar, tenemos que saber que el coronavirus SARS-CoV-2 es una especie de virus que apareció a finales de 2019 en el territorio de Wuhan, en China. En humanos este virus es capaz de causar diferentes afecciones respiratorias agudas y neumonías.
La prueba diagnóstica principal y más segura, tanto de este nuevo coronavirus, como para otro tipos de microorganismos, es la famosa PCR. Estas letras son las iniciales de la técnica utilizada en dicha prueba que es (polymerase chain reaction) o Reacción en Cadena de la Polimerasa en español.
Dicha prueba consiste en obtener un gran número de copias de fragmentos de DNA concretos a través de un proceso conocido como amplificación. Todo ello se realiza en un aparato llamado termociclador.
Para realizar la técnica se necesitan:
- Los 4 desoxirribonucleótidos-trifosfato (dNTP), sustratos para polimerizar nuevo ADN.
- Dos cebadores o iniciadores (en inglés, primers), oligonucleótidos que son, cada uno, complementarios a una de las dos hebras del ADN. Son secuencias cortas, de entre seis y cuarenta nucleótidos, normalmente de dieciocho a veintidós, que permiten que la polimerasa inicie la reacción. Deben estar enfrentados y no a mucha distancia. Delimitan la zona de ADN a amplificar, es decir, corresponden a los nucleótidos que definen los extremos de la secuencia que se desea replicar.
- Iones divalentes. Se suele usar magnesio (Mg2+), agregado comúnmente como cloruro de magnesio (MgCl2), o algún otro catión divalente. También se puede emplear manganeso (Mn2+), para mutagénesis de ADN mediante PCR, ya que altas concentraciones de Mn2+ incrementan la tasa de error durante la síntesis de ADN. Actúan como cofactores de la polimerasa.
- Iones monovalentes, como el potasio.
- Una solución tampón o buffer que mantiene el pH adecuado para el funcionamiento de la ADN polimerasa.
- ADN polimerasa o mezcla de distintas polimerasas con temperatura óptima alrededor de 70 °C (la más común es la polimerasa Taq).
- ADN molde, que contiene la región de ADN que se va a amplificar.
- Termociclador, el aparato que mantiene la temperatura necesaria en cada una de las etapas que conforman un ciclo.
A estas alturas y si has llegado hasta aquí con la lectura te estarás preguntando: Pero según lo que has puesto la PCR solo puede ampliar DNA (por lo que has marcado en negrita en las fases de la PCR) y este virus es RNA entonces ¿cómo es posible utilizar la PCR para detectar la infección por coronavirus? Pues… utilizando una variante de la PCR estándar, la RT-PCR, que se vale de la ayuda de un enzima muy particular, la transcriptasa inversa.
El proceso de la PCR, dependiendo de cada técnica, puede durar horas o incluso días. Pero este no es el final. Ahora hay que ver los resultados.
En la PCR cuantitativas, se añaden reactivos que produzcan fluorescencia de manera directamente proporcionar a la cantidad de RNA ampliado, que a su vez depende de la cantidad de caga viral (a mayor fluorescencia mayor carga viral).
¿Cuales son los problemas de esta técnica?
Que en las muestras siempre hay muchísimos tipos de DNA, ya sea de bacterias, DNA humanos, de otros virus, etc.
Por ello, con los avances científicos se han podido ¨aislar¨ los fragmentos de DNA o RNA que nos interesan y poder ampliarlos sin que haya contaminación de otros.
Karam Ramadan
Técnico en farmacia y parafarmacia.
Técnico superior en Laboratorio de Diagnóstico Clínico y Biomédico.
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